掌握这些固相萃取知识,你就能成为实验室最靓的仔
  • 日期:2020-07-06 浏览:5

近年来分析检测技术有了很大的飞跃,但样品前处理依然是科研工作者必须面对的挑战。固相萃取系统


固相萃取(Solid Phase Extraction,简称SPE)是一种从二十世纪七十年代中期开始发展起来,用途广泛而且越来越受欢迎的样品前处理技术。根据吸附剂填料及吸附机理的不同,主要分为正相、反相、离子交换和混合型固相萃取小柱,正相、反相固相萃取小柱主要是用来萃取分离极性和非极性化合物,但对一些带电物质(离子化合物)的萃取回收率并不高,如C18填料固相萃取小柱,当目标化合物呈离子状态时,C18对于该化合物的容量因子就会大大降低。为了解决这一问题,月旭推出了硅胶基质和聚合物基质的离子交换固相萃取小柱。


下面就由小编为大家介绍离子交换固相萃取小柱方法开发中需要注意的问题。


离子交换固相萃取适用于可解离成带电离子的化合物,其机理是利用带电荷的目标化合物离子与带相反电荷的吸附剂之间的静电吸引力。样品基质可以是极性的,如水溶液,也可以是非极性的有机溶液,但在实际应用中以水溶液较多,包括生物体液、江河湖海等自然水、废水等。



方法开发


第一步:


我们要分析的目标化合物必须具备下列任意一种或以上的官能团才能通过离子作用力将其从样品溶液中分离出来:


(1)可生成阳离子的官能团(带正电荷)


(2)可生成阴离子的官能团(带负电荷)


而且待分析的目标化合物必须在一定的pH环境下才能呈离子化或中性化。

 


 第二步:


要有效地利用离子交换机理将目标化合物吸附在SPE柱上,必须满足以下两个条件:


(1)目标化合物离子与吸附剂官能团的离子态带相反电荷;


(2)萃取环境的pH必须同时使目标化合物和吸附剂上的官能团带电荷;


(3)萃取环境不能含有高浓度的带有和目标化合物相同电荷的竞争化合物。


在实际操作中,为了满足前两个条件,确保99%以上的目标化合物及固相萃取吸附剂上的官能团能够呈离子态或呈中性状态,应该根据目标化合物及固相萃取吸附剂官能团的pKa来调节样品或SPE柱的pH。


 


那么小编为大家介绍一下pH与pKa值的关系:


对于一个可生成离子的化合物,pKa是该化合物50%呈离子状态,50%呈中性状态时的pH。固相萃取系统


就弱酸性化合物HA而言,其在水中的解离平衡方程式为:


 


从式三可以看到,当pH与pKa相同时,[A⁻]/[HA]为1。也就是说,这时50%的弱酸性化合物呈阴离子状态,另外50%呈中性状态。在该pH环境下,即便这些呈阴离子状态的化合物100%地被阴离子交换剂吸附,之后又100%地被洗脱,zui高回收率也只能达到50%。因为只有50%的弱酸性化合物呈离子状态,并被阴离子交换剂吸附。由此可见在离子交换固相萃取中,控制环境的pH十分重要。



[A⁻]/[HA]越大,代表弱酸性化合物离子化程度越大。理论上,当[A⁻]/[HA]等于100时,99%的弱酸性化合物呈阴离子状态,可以被阴离子交换剂吸附。根据式三,在进行阴离子固相萃取吸附时,要使弱酸性化合物99%离子化,样品基质的pH应该高于该化合物pKa至少两个pH单位。反之,在对该弱酸性化合物进行洗脱时,应该将环境的pH调节至低于该化合物pKa至少两个pH单位,此时弱酸性化合物99%呈中性状态,用适当的溶剂就可以将其从阴离子交换柱上洗脱下来。



式三同样可以用于可生成阳离子官能团的弱碱性化合物。这时我们将弱碱性化合物看作共轭酸[HA+],并将该公式改写为:



与弱酸性化合物相反,在阳离子交换固相萃取中,要使弱碱性化合物99%解离为阳离子,需要将该弱碱性化合物所处的环境体系的pH应该低于该化合物pKa至少两个pH单位。而在洗脱时,环境体系的pH应该高于该化合物的pKa至少两个pH单位,此时99%的该化合物呈中性状态,用适当的溶剂就可以将其从阳离子交换柱上洗脱下来。


 


第三步:


离子交换固相萃取柱种类的选择:为了能够有效地将被吸附的离子化合物洗脱出来,对于含有强离子官能团的目标化合物一般选用弱离子交换柱;而对于含有弱离子官能团的化合物,则可选用强离子交换柱。这样可以避免目标化合物和吸附剂官能团同时处于离子化状态,导致目标化合物始终处于的保留状态无法被洗脱。